밀도 경도 원심분리(isodensity centrifugation method)는 구대 원심분리라고도 한다.

이 방법의장점샘플에서 여러 가지 또는 모든 그룹을 동시에 분리할 수 있으며 해상도가 우수하고 분리 효과가 좋으며 한 번에 더 순수한 그룹을 얻을 수 있습니다.

단점원심분리시간이 비교적 길고 경도액을 제조해야 하며 조작요구가 높다.

원심 분리 원리에 따라 밀도 경도 원심은 또속도 대역 원심법(Rate Zonal Centrifugation Method, R-Z)和등밀도 원심법 (isopycnic centrifugation method)

속도 대역 원심은 등구 밀도 원심이라고도 할 수 있으며, 샘플에서 서로 다른 성분 입자가 가지고 있는 서로 다른 부피 크기와 서로 다른 침강 계수에 따라 혼합 샘플을 원심 분리하여 정제하는 것이다.

원심분리할 때 분리해야 할 견본용액을 밀도계도재료 (예를 들면 사탕수수당, 염화세슘 (CsCI), * 등) 로 형성된 계도액기둥 위에 놓으면 견본립자의 밀도는 반드시 계도액기둥 중 어느 한 점의 밀도보다 커야 한다. 그렇지 않으면 리상적인 구역원심분리효과를 얻을수 없다.원심을 분리할 때 혼합견본중의 부동한 조분은 경도액기둥의 부동한 위치에서 각기 각자의 구역대를 형성하고 적합한 회전속도와 시간을 선택하여 원심을 분리하며 각 조의 구역대거리가 멀리 당겨졌을 때 원심을 끝낸후 구역대를 제거한다.이렇게 하면 한 번의 원심분리를 통해 혼합 샘플 중의 각 조를 분리하여 정제할 수 있으며, 그 순도와 회수율은 모두 요구를 만족시킬 수 있다.

장점한 번의 분리 순화로 조분의 침강 계수 차이가 20% 이상인 경우 이 방법을 선택할 수 있으며, 해상도가 높고, 조작 숙련으로 조분의 침강 계수 차이가 5~10% 인 샘플을 잘 분리할 수 있다.

단점재료의 조건제한으로서 견본액의 농도가 너무 높아서는 안되며 그렇지 않을 경우 조작조건을 통제하기 어려우며 동시에 이 법은 차속원심법에 비해 견본을 처리하는 양이 훨씬 적다.

그림 1 속도 영역 원심 분리

속도구역이 원심을 띠는 시간은 반드시 엄격히 통제해야 하며 너무 짧아서는 안된다. 그렇지 않을 경우 견본구역이 똑똑히 띠지 못하고 시간도 너무 길어서는 안된다. 그렇지 않을 경우 분리대기 성분은 가라앉을수 있다.분리가 필요한 시료 입자의 침강 속도는 입자 모양, 크기, 밀도 및 원심력 등에 따라 달라진다.원심 분리 전후 샘플의 상태는 그림 1과 같다.

속도 영역 원심분리의 고전적인 응용은 바로 사탕수수 밀도 경도 원심분리를 통해 각종 아세포기 (핵당체, 미토콘드리아, Exosome 등) 와 바이러스 입자 (바이러스 운반체, 백신 등) 의 순화를 진행하는 것이다.예를 들어, 우리가 지난 호에서 얻은 70S 핵당체 침전은 수해를 거친 후 사탕수수 밀도 경도 원심분리를 이용하여 50S와 30S의 두 개의 아기를 더 분리하고 순화시킬 수 있다.구체적인 실험 절차는 다음과 같다.

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* 개정: 2020/10/16

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